CRISPR Guide RNA Transcription Kit

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产品简介

本试剂盒可用少量DNA模板获得高效转录，合成gRNA（适用于Cas9、Cas12、Cas13和Cas14等的gRNA制备）。0.5 μg DNA模板单次反应可获得产量150 μg以上的gRNA。

产品组成

体外转录原理

质量控制

经检测无残留核酸，无外源核酸酶活性。

体外转录反应条件

1.       将所有实验材料从-20℃取出解冻，振荡混匀，短暂离心收集液体于管底；

2.       配制反应体系，严格按照以下顺序加入各组分：水→Buffer→NTP→DNA模板→酶。

3.       37℃温浴1-2 h；

4.       加入1 μl DNase I (1 U/μl)，混匀，37℃反应30 min，去除Template DNA；

5.       转录产物纯化：

a)          反应产物中加入5 µl Purification Buffer，再加入150 µl 95%乙醇，-30℃静置20 min，12000 rpm离心10 min，弃上清；

b)         加入500 µl 75%乙醇，12000 rpm离心10 min，弃上清；

c)          重复上述b步骤；

d)         室温放置2min，加入50 µl Nuclease-Free Water，-80℃保存。

应用实例

1.        制备AapCas12b的sgRNA

2.       制备LwaCas13a的sgRNA

注意事项

1.       T7启动子与gRNA之间额外添加“GGG”，最终获得的gRNA 5端会增加“GGG”。

2.       质粒需要在转录片段下游将其线性化，PCR产物建议纯化后进行转录，可提升转录效率。

3.       使用RNase-free耗材，操作台建议喷RNase清除剂，佩戴一次性手套和口罩。

4.       本产品适用于含有T7启动子的线性化质粒，也适用于含有T7启动子的PCR产物和合成DNA等。