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产品编号 30531
规格
Store at: –20℃或–80℃
产品简介 LwaCas13a（C2c2）是一种由crRNA单独介导的RNA内切核酸酶，它源自Leptotrichia wadei菌株。该酶能够特异性识别并切割靶标单链RNA，并且对PFS序列的要求相对宽松。此外，Cas13a具备反式剪切活性，也称为旁路剪切活性或附属剪切活性。具体而言，当LwaCas13a蛋白与crRNA、靶标RNA结合形成三元复合物后，它会被激活，进而展现出针对非特异序列单链RNA的反式剪切活性，将体系内任意序列的单链RNA切割成片段。这种反式剪切活性在靶标核酸快速检测试剂盒的开发中具有重要应用价值。如基于Cas13a蛋白开发的“SHERLOCK”分子诊断系统。
产品来源
分子量 138 kDa。
质量控制 SDS-PAGE检测纯度大于99%，经检测无外源核酸酶活性和核酸残留。
产品组成
crRNA序列设计 5′–GAUUUAGACUACCCCAAAAACGAAGGGGACUAAAACNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN–3′,（粗体区代表scaffold sequence结构序列，下划线区代表crRNA与特异靶标序列互补配对的spacer区，建议spacer区长度为28 nt)。
ssRNA Reporter设计 推荐单碱基重复碱基序列，如：5′–FAM/ rUrUrArUrU/BHQ1–3′。
反式剪切实验 1、将以下组分加入到无核酸酶的微量离心管中：
注：反式剪切体系中各组分的用量可以根据不同的实验目的进行调整，用量较少时可先将各组分稀释后加入体系，ccCas13a Nuclease可用1×Reaction Buffer 稀释，稀释后需立即使用（若要稀释后的Cas13酶长期保存，请使用Cas Dilution Buffer，#30611），crRNA、Target RNA及ssRNA Reporter可用Nuclease-free Water稀释，但极低浓度的Target RNA（例如LOD实验）建议用0.1% Tween 20稀释，并使用低吸附的离心管、吸头等耗材。 2、实时荧光定量 PCR仪检测荧光信号，37℃反应，每 30 sec采集一次荧光信号。
注意事项 1、Cas13a的顺式剪切(cis-cleavage): Cas13a在 crRNA的引导下，特异性地剪切 target RNA，且对 target RNA的 PFS序列要求并不严格。 2、Cas13a的反式剪切(trans-cleavage): 当 target RNA存在时，Cas13a/crRNA与 target RNA形成三元复合物(Cas13a/crRNA/target RNA)，同时，Cas13a被激发反式剪切活性，将反应体系中任意序列的单链 RNA切碎。 3、Cas13a蛋白对热敏感，容易失活，应全程冰上配置反应体系，并在使用后立即将酶置于-20℃保存。
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