毛霉目真菌核酸检测试剂盒(荧光PCR法)

本试剂盒用于定性检测人肺泡灌洗液、气管分泌物、组织等样本中可感染人的毛霉目真菌核酸，包括根霉（Rhizopus）、毛霉（Mucor）、横梗霉（Lichtheimia）、根毛霉（Rhizomucor）、小克银汉霉（Cunninghamella）。

毛霉目真菌主要感染免疫力功能低下的严重基础疾病患者，在严重免疫力功能低下患者中，毛霉目真菌可与宿主内皮细胞发生特异性结合而引起内皮细胞损伤和菌丝侵入血管，导致疾病播散，血栓形成和组织坏死。

本试剂盒采用荧光定量PCR反应，结合Taqman技术。以毛霉菌基因设计特异性引物和荧光标记的探针。反应液添加了UNG/dUTP防污染体系，在扩增过程中尿苷酶（UNG）能特异地破坏含有dUTP的核酸，使之不能作为扩增模版，但对天然的不含dUTP的核酸不起作用。随后将UNG酶灭活，再进行扩增。可以有效地防止实验室内扩增产物的污染，避免假阳性的出现。PCR扩增过程中，探针分别与模板结合时，当扩增延伸到探针结合的位置时，Taq酶利用5'外切酶活性，将探针5'端连接的荧光分子从探针上切割下来，从而远离淬灭基团，产生荧光信号。检测到的荧光分子数与PCR产物的数量成正比，进而荧光定量PCR，根据检测到的荧光信号自动绘制出实时扩增曲线，并计算出样本Ct值（每个反应管内的荧光信号到达设定的阈值时所经历的循环数）。通过检测荧光信号的强度和扩增曲线的形状来判断是否有特异的PCR产物形成，从而判断所测样本中是否含有目的DNA片段。其中毛霉菌相关基因，采用FAM荧光基团标记，同时PCR体系包含有内源性的内标引物和探针，由ROX通道检测内参基因。通过检测内标是否正常来检测样本采集、提取过程，避免假阴性结果。