1、目的及适用范围
分子筛层析（Gel filtration），排阻层析或凝胶渗透色谱，主要是根据混合物中各种分子的分子量不同，通过固定相凝胶时,分子的扩散速度各异，不同大小的蛋白分子得到分离和纯化的目的。Superdex 200TM分离范围是10kd-600kd，Superdex 75TM分离范围是5kd-70kd。
2、主要仪器
AKTA FPLC、Superdex 200TM层析柱或Superdex 75TM层析柱、冷冻台式高速离心机、真空抽滤泵、22μM微孔滤膜。
3、试剂及配置方法
根据所纯化蛋白及所需条件配置适当的缓冲溶液，层析柱的ph耐受范围为3-12。水、20%乙醇。
4、相关的预处理
4.1 过分子筛所用的水及溶液在使用前必须用0.22μm微孔滤膜抽滤。
4.2 将所纯化蛋白用与分子筛所用的Buffer换液浓缩至不超过600μL。
5、操作步骤
5.1 打开电脑，进入AKTA系统。
5.2打开AKTA电源，连接系统。
5.3进入UniCorn系统。
5.4用水洗A泵。
5.5设置层析柱的压力上限（不超过1.0MPa）及适当的流速。
5.6将Superdex 200TM层析柱或Superdex 75TM层析柱与FPLC连接。
5.7用至少1个柱体积的水冲洗层析柱。
5.8用至少1个柱体积的缓冲溶液平衡层析柱。
5.9将准备好的样品于4℃，12000rpm离心10-20min。
5.10在Load状态下通过上样环上样。
5.11在Inject状态下样品进入系统，并在2mL时调回Load状态。
5.11.1缓冲液（流动相）和样品流过柱子，分子进入不同的材料孔中。小一些的分子移动的距离更远进入材料，在柱子中停留时间更长；
5.11.2当缓冲液持续流过柱子，大于材料孔的分子不能进入孔中，流过柱子。小分子进入孔中，延时流过柱子；
5.11.3大分子首先离开柱子，紧接着依次是小一些的分子，全部分离过程需要一个全柱体积（相当于柱床体积）的缓冲液通过凝胶过滤材料。
5.12 根据吸收值得变化，收集吸收峰下蛋白。
5.13 用至少1个柱体积的水平衡柱子。
5.14 用20%乙醇冲洗层析柱，并于4℃保存。
6、注意事项
6.1 分子筛层析过程使用的溶液在使用前必须用0.22μM微孔滤膜过滤。
6.2 蛋白溶液在进入分子筛前要换成与分子筛使用的缓冲液一致。
