哺乳动物细胞的脂质体转染

1、目的及适用范围
本SOP适用于高效转染DNA进入真核细胞的操作。
2、主要仪器及试剂
CO2细胞培养箱、超净工作台（生物安全级别）、Opti-MEM培养基、LipofectamineTM2000转染试剂
3、操作步骤
3.1提前24h准备细胞，使之在转染时达到90%以上的汇合度。
3.2转染前2h更换Opti-MEM培养基。
3.3将需转染的质粒和LipofectamineTM2000分别用Opti-MEM培养基按照下图比例稀释，混匀，5min后将两者混合，室温静置20min后加入至细胞培养液中，前后轻柔摇动培养基使之混匀。
4、注意事项
4.1由于脂质体对细胞有较大毒性，为了提高转染和表达效率，减小细胞毒性，转染时细胞密度不可低于90%；或者缩短转染后换液时间。
4.2为了达到最高转染效率，DNA（μg）：脂质体（μL）可在1:0.5到1:5范围内优化。转染前细胞培养基中不可加抗生素，否则细胞会大量死亡。

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