1、目的及适用范围
该SOP用来规范哺乳动物细胞HepG2电转化的操作。
2、主要仪器
MicroPulser 电穿孔仪(Bio-Rad)、配套电击杯
3、试剂及配制方法
电转液：HEPES buffered saline，6mM glucose(可选择加入50μL FBS、50μL salmon sperm DNA)
4、操作步骤
4.1 细胞培养于含10S的DMEM中，使在电击时达到50-70%的密度。
4.2 消化收集细胞，使用电转液冲洗细胞2遍，电击前将5×106的细胞重悬于0.5mL电转液中，4℃下孵育10min。
4.3 室温下电转，将10μg DNA和电转液混合，终体积达到800μL左右，和细胞液混合，加入0.4cm 电转杯中。
4.4电转参数为：电压 0.220kV、场强度 0.55Kv/cm、电容 960 μf、时间常数为20.0 msec
4.5电转结束后细胞加入10S的DMEM培养，次日换液，去除死细胞，之后常规培养。
5、问题向导
各种不同的细胞具有不同的电转参数，在各自的电转仪的官方网站上可以找到相应的步骤和参数。
在进行电转时细胞密度尽量大些，防止电转后存活细胞过少，铺板后生长缓慢。
