1、目的及适用范围
该SOP用来规范FCM流式细胞术检测细胞表面的蛋白的操作。
2、主要仪器
流式细胞仪BD FacsAria、冷冻台式离心机
3、试剂及配制方法
Flow cytometry buffer(PBS含 2mM EDTA、2% FCS和0.1%NaN3 )、目的蛋白的抗体、荧光标记二抗
4、相关器皿的预处理
相关试剂和仪器需要预冷
5、操作步骤
5.1 提前24h铺设细胞至35 mm 皿中，次日用5mM EDTA消化细胞，每管收获约1×105细胞，4℃下Flow cytometry buffer洗涤三次，1000rpm，10min离心收集细胞，重悬于50μL Flow cytometry buffer中。加入需检测的蛋白的抗体，4℃下孵育30min，适时晃动，使结合充分。
5.2 Flow cytometry buffer洗涤三遍，1000rpm，10min离心收获细胞，再次悬浮于50μL Flow cytometry buffer中，加入荧光标记的二抗，4℃避光孵育30min，适时晃动，使结合充分。
5.3 Flow cytometry buffer洗涤三遍，1000rpm，10min离心收获细胞，重悬于500μL Flow cytometry buffer中，流式细胞仪检测。
6、注意事项
由于细胞膜存在流动性，在检测细胞表面蛋白时，全程尽量在低温下进行。根据检测情况，适时调整抗体结合量和结合时间。
