1、目的及适用范围
该SOP用于分离纯化目的DNA片段。
2、主要仪器及试剂
台式离心机、微量移液器、binding buffer、wash buffer、elution buffer,各试剂均来自胶回收提取试剂盒。
3、实验步骤
3.1 琼脂糖电泳,将特异电泳带用刀切下放入到离心管中,称琼脂糖带的重量;
3.2 按照每100mg加400?L的量加入binding buffer,放入到离心管振荡器中,45℃~55℃温育振荡,直到所有的琼脂糖都溶解(大概要5min);
3.3 取出纯化柱,将上述溶解液转移至柱中,室温下放置2min,8000rpm 离心1min,弃离心管中的液体,将纯化柱放回离心管中;
3.4 加500?L的wash buffer至柱中,8000rpm 离心1min,弃管中的溶液;
3.5 重复操作4步的操作1次,最后将纯化柱放入EP管中10000rpm离心30s,除去残余的wash buffer;
3.6 将纯化柱放入一个新的离心管。加30~40?L H2O或者elution buffer至纯化柱膜的中央,在37℃或50℃下放置2min,10000rpm离心1min洗脱DNA,将离心管中的DNA溶液放在-20℃保存。
4、注意事项
若想要不电泳而直接纯化DNA,只需要在第2步中按100?L液量加400?L的binding buffer,其余的步骤不变。