1、目的及适用范围
将大肠杆菌经CaCl2处理后使其细胞膜通透性增高，以便于外源DNA分子的进入，可满足大肠杆菌体外转化的需要。
2、主要仪器及试剂
恒温摇床、超净工作台、制冰机、高温灭菌锅、冷冻台式高速离心机、超低温冰箱、0.22μm滤器、LB平板、LB液体培养基、0.1M CaCl2、85%甘油
3、相关器皿的预处理
3.1 试管及50mL离心管均需高压灭菌。
3.2 用于分装感受态细胞的1.5mL离心管需置于冰上预冷。
4、操作步骤
4.1 取出保藏的菌种，划线LB平板（一般无抗性），37℃培养过夜。
4.2 挑取单菌落接于含5mL LB液体培养基的试管中，37℃振荡培养过夜。
4.3 1:500接种于100mL LB液体培养基中，37℃振荡培养至菌液的OD600值约在0.4~0.6之间。
4.4 将培养液移入50mL离心管中，冰浴10min，于4℃，4000~4500rpm离心10min。
4.5 弃去上清，加入15mL预冷的0.1M CaCl2，混匀，冰浴30min，4℃，2500~3500rpm离心10min。
4.6 弃去上清，加入1.68mL 0.1M CaCl2, 加入320μL 85%甘油，分装，0.1mL/管。
4.7 ﹣80℃保存3个月内使用。
5、注意事项
5.1 加入CaCl2后细胞膜较脆弱，因此必须小心处理，轻柔操作。
5.2 全过程中应尽量保持低温，以保证制备准备效率。
