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规格
Store at: –20℃
产品简介 本试剂盒利用T7 RNA Polymerase能在相对较短时间内进行体外转录获得大量RNA。以线性化质粒、PCR产物或合成的DNA片段等为模板，可获得150 μg以上的RNA。制备的RNA可用于体外翻译、RNase保护实验、RNA剪切以及杂交探针标记等。长链和短链的RNA都有很好的转录效果，也可以按比例放大反应体系，从而可以轻松获得毫克级的RNA。
用途 1. 合成单链RNA，包括mRNA，siRNA，gRNA等各类RNA的前体。 2. 合成标记或未标记的高特异性RNA探针。 3. 利用帽子类似物合成加帽的mRNA。
产品组成
体外转录原理
质量控制 经检测无残留核酸，无外源核酸酶活性。
RNA产量
体外转录反应条件 1. 将所有实验材料从-20℃取出解冻，振荡混匀，短暂离心收集液体于管底； 2. 配制反应体系，严格按照以下顺序加入各组分：水→Buffer→NTP→DNA模板→酶。
3. 37℃温浴2 h； 4. 加入1 μl DNase I (1 U/μl)，混匀，37℃反应15 min，去除Template DNA； 5. 合成的RNA经纯化、质控合格后可用于后续实验或工艺。
常见问题 1. 长链RNA转录产物产量低 若长链RNA（>0.3kb）产量低于预期，可能因DNA模板有污染物抑制RNA聚合酶活性、模板浓度有误或3′端为3′突出末端。 解决办法：重新酚氯/仿抽提纯化DNA并除净苯酚；确定模板浓度与完整性；延长37℃反应时间；增加模板用量；尝试T3或SP6启动子及相应聚合酶；避免3′突出末端。 2. 短链转录产物产量低 短链转录产物（<0.3kb）可通过延长反应至16小时或使用2μg以上模板提高产量。线性化内切酶不能产生3’突出末端，否则会降低产量。 3. RNA转录产物降解 变性凝胶电泳发现RNA降解，可能是DNA模板或操作被RNase污染，影响RNA长度与产量。需对模板DNA进行苯酚/氯仿抽提、乙醇沉淀，溶解于无核酸酶水中，操作严格防RNase污染。若DNA模板降解，通过电泳分析排查。 4. 出现超长RNA转录产物 变性凝胶中出现超长RNA，可能是质粒DNA模板未完全线性化，少量环状质粒也会产生大量长转录产物。转录前检查模板线性化情况，未充分线性化则再次酶切或凝胶电泳回收。此外，RNA二级结构强变性不充分也可能出现大条带。 5. 出现超短RNA转录产物 变性凝胶电泳出现超短RNA，可能是转录酶过早终止，类似T7 RNA聚合酶终止信号序列会导致提前终止。可降低转录温度（如30℃）增加长转录产物比例但降低总产量，富含GC或有二级结构的模板在42ºC孵育可增加长转录产物产量。RNA二级结构强变性不 充分也可能出现短条带。
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