ThemoStable RNase HII 热稳定核糖核酸酶H2

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产品简介

ThemoStable RNase HⅡ（耐高温核糖核酸酶 H2）是一种内切核糖核酸酶，特异性地水解 DNA/RNA 杂交链上的 RNA 的磷酸二酯键，但不会水解单链和双链 DNA 或 RNA 中的磷酸二酯键。该酶在单核糖核苷酸残基处从 5′端进行切割，切割后产生一个 5′端磷酸基团和一个 3′端羟基。该在60~70℃具有最佳活性，在50 ~75℃间均具有活性，但是室温下活性极低。该酶极度耐热，95℃孵育45 min后，几乎没有活性损失，可与PCR各反应体系兼容。

产品来源

重组E. coli菌株。

质量控制

SDS-PAGE检测纯度大于99%，经检测无外源核酸酶活性和核酸残留。

产品组成

10×Reaction Buffer：200mM Tris-HCl, 600mM KCl, 0.1% Triton X-100, 30mM MgCl₂, 1% glycerol，pH8.4

酶活定义

在 60℃ 15分钟切割 1nmol的DNA/RNA 杂交双链底物所需的酶量定义为 1 U。

产品应用

1.         RNase H2 依赖性 PCR（rhPCR）。

2.         LAMP 高灵敏度探针法检测。

3.         切除聚合酶聚合过程中错配形成的核糖核苷酸。

4.         冈崎片段 RNA 部分的降解。

应用实例

一、 去除DNA/RNA 杂交双链中的RNA 

1、将以下组分加入到无核酸酶的微量离心管中：

2、50-70℃反应 15 min~30 min。

二、 rhPCR扩增

1、将以下组分加入到无核酸酶的微量离心管中：

2、95℃ 1min，循环 45 次（95℃ 10s，60℃ 30s）。

注意事项

1、 该酶用于 rhPCR（依赖于 Rnase H2 的 PCR ）时，需要使用 3′端带封闭基团的 DNA 引物（Blocked 引物）。引物 3′端可以采用 C3 Spacer 或 NH2 封闭，3′末端第 5位为单碱基的 RNA 碱基。

2. 该酶与绝大多数的 PCR 缓冲体系兼容，最佳 mg²⁺浓度 2~3mM。

3. 该酶极其耐热，95℃30min 活性无显著降低，故不可通过热失活，0.1% SDS 可将其失活。

4. 在探针法LAMP 中可将RNase H2提前稀释后使用，推荐稀释缓冲液（#70443）。