Pyrophosphatase, Inorganic无机焦磷酸酶

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产品简介

本品是大肠杆菌重组表达酵母源的无机焦磷酸酶，可催化无机焦磷酸盐水解生成正磷酸盐。核酸扩增实验中，可水解随着反应生成的无机焦磷酸盐，避免其对反应的抑制，促使反应平衡向产物生成方向平移。可用于体外转录反应中提高 RNA产量。

用途

1.       优化核酸扩增反应，提高反应效率并增加核酸产量。

2.       促进蛋白质和核酸的合成。

3.       在其他存在PPi干扰的应用中使用，催化降解PPi以解除其对反应的干扰。。

产品组成

储存缓冲液

20 mM Tris-HCl (25℃，pH 8.0)，100 mM KCl，0.1 mM EDTA，1 mM DTT，50% Glycerol。

单位定义

每分钟催化水解焦磷酸根(PPi)，产生1 µmol正磷酸根(Pi)所需要的酶量定义为1个活性单位。

质量控制

SDS-PAGE检测纯度大于98%，经检测无残留核酸，无外源核酸酶活性。

体外转录反应条件

1.       将所有实验材料从-20℃取出解冻，振荡混匀，短暂离心收集液体于管底；

2.       配制反应体系：

3.       37℃温浴1-2 h；

4.       加入1 μl DNase I (1 U/μl)，混匀，37℃反应15 min，去除Template DNA；

5.       合成的RNA经纯化、质控合格后可用于后续实验或工艺。

注意事项

1.       不同序列反应速率存在数倍甚至10倍的差异，推荐体系适合新序列初次实验使用。

2.       建议先在推荐体系下设置T7 RNA Polymerase用量，再梯度确认特定孵育条件下的合适用量。

3.       NTPs用量决定了体系的产量平台，在4种碱基比例均衡且T7 RNA Polymerase用量充足的条件下，建议梯度摸索最佳用量。

4.       酶制品中均含有甘油成分，建议体系中酶制品添加总体积不超过反应体积的1/5，使用中建议反复冻融不超过7次。

5.       Template DNA可通过发酵后线性化或PCR扩增获得；质粒DNA抽提过程中引入的RNase A残留会显著影响转录RNA的质量，建议使用OD260/280为1.8 - 2.0的高纯度RNase-free质粒。

6.       产量与反应时间成正比，对于推荐反应条件下有一定基础产量但未达到产量平台的场景，可以选择延长反应时间以达到产量平台，反应时间可以根据需求在0 - 4 h之间调整。

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