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Benzonase全能核酸酶介绍1. 产品简介 全能核酸酶，又称广谱核酸酶，英文名称Benzonase Nuclease，一种来源于Serratia Marcescen的基因工程酶。它可以降解所有形式的DNA和RNA，包括单链、双链、线状、环状、天然以及变性的核酸，将它们消化成3-8个碱基长度的5-单磷酸寡核苷酸，且不具有碱基识别特异性。另外，全能核酸酶在非常广泛的条件下（6M urea，0.1 M Guanidine HCl，0.4% Triton X100，0.1% SDS，1 mM EDTA，1 mM PMSF）都能保持很高的稳定性和消化活力，非常适用于作为各类科学研究以及疫苗、蛋白、多糖类制药工业的首选酶制剂，去除样本或制品中的核酸残留，提升样本纯度和制品生物功效。
图1 全能核酸酶结构图 2. 产品应用范围 1）用于除去生物制品中的DNA/RNA 美国FDA对治疗用每剂量的生物制品的核酸含量要求为低于10 pg，国内对此相应的要求为低于100 pg。全能核酸酶可用于疫苗、多糖、蛋白等工业生物制品中核酸的去除，使生物制品的最终核酸含量符合要求，同时提高生物制品功效。 2）用于降低细胞破碎后的粘度 全能核酸酶可以降解所有形式的核酸，降低细胞裂解液的粘度，提高蛋白得率，改善分离效果，使之易于过滤（尤其是超滤），利于下游层析纯化操作。
图2 细胞裂解液全能核酸酶处理（A）和未处理（B）比较图 3）用于细胞培养来源产物的纯化过程 核酸很容易粘附在病毒样颗粒（VLP）、病毒粒子、包涵体等细胞生成颗粒的表面，使颗粒大小或电荷发生改变，造成这些颗粒的聚集，如外周血单细胞（PBMC）存放过程中的结块现象。全能核酸酶可有效降解核酸，避免核酸对细胞产物的影响以及纯化效率，利于提高细胞产物纯化效率。 4）用于生化分析样品的制备 在ELISA、色谱分析、双相电泳和足迹分析等过程中，用全能核酸酶处理含有核酸的蛋白样品，可提高分辨率，并提高回收率。
图3 小鼠脑核蛋白全能核酸酶处理（A）和未处理（B）双向电泳比较图 3. 产品使用条件 全能核酸酶在非常广泛的条件下，都能保持很高的稳定性和消化活力。全能核酸酶可耐受6 M Urea，0.1 M Guanidine HCl，0.4% Triton X100，0.1% SDS，1 mM EDTA，1 mM PMSF，0.4% Sodium deoxycholate。 推荐使用条件：
在最佳条件下推荐的使用量及处理时间（37℃，2 mM Mg2+，pH 8.0）
4. 常见问答 Q. 产品按多少比例加入？ A：建议加入比例(终浓度)为1:1000-1:20000，具体需依据反应时间、温度、以及待处理样本中的盐离子浓度。
Q. 产品能否可以减少用量？ A：如希望减少用量，需适当延长处理时间。
Q. 全能核酸酶的抑制因素有哪些？ A：在含有以下物质的体系中，全能核酸酶的活性会降低50%或以上：>150 mM一价阳离子，>100 mM磷酸盐，>100 mM硫酸铵，>100 mM盐酸胍，>0.1% SDS，>1% Triton X-100，>1% Tween 20。
Q. 怎样灭活全能核酸酶？ A：采用EDTA螯合金属离子会可逆地抑制全能核酸酶活性，极端条件会造成不可逆失活，例如100 mM NaOH，70℃处理30 min等。
Q. 如何去除处理后样本中的全能核酸酶？ 亿目思的全能核酸酶分为无标签、His标签和Strep标签三种版本。若所处理的样本无标签，则可选择带标签的全能核酸酶，通过相应亲和resin去除残留核酸酶；若所处理的样本带有His标签，则可选择无标签的全能核酸酶，通过亲和层析吸附目标蛋白，从而去除残留核酸酶；若所处理的样本是无标签和带His标签的混合蛋白，则可选择带Strep标签的全能核酸酶，通过Strep亲和resin去除残留核酸酶。
Q. 全能核酸酶与蛋白酶抑制剂混合物是否兼容？ A：全能核酸酶与不含EDTA的蛋白酶抑制剂混合物兼容。若含有EDTA且浓度>1 mM时，会抑制核酸酶活性，建议：如果必须加EDTA，按照2倍EDTA浓度补加Mg2+。
Q. 如何确认样本中是否还有全能核酸酶残留？ A：可用亿目思的全能核酸酶残留检测试剂盒进行鉴定，仅需10分钟即可对样本中的残留核酸酶进行定量鉴定，最低检出限达0.001 ng/mL。
Q. 产品的用量是多少？ A：需要根据重悬菌体所需裂解液的体积来确定需要酶的量。若普通蛋白纯化，则需要浓度为25 U/mL；核蛋白则需要100 U/mL；病毒表达蛋白纯化需要浓度为12.5 U/mL；疫苗产品需要量为0.9-1.1 U/mL。具体用量还需要参照待处理样本成分进行调整。
Q. 产品的稳定性如何，如果不小心在室温放置几天后，酶活性会受到怎样的影响？ A：室温2-3天，对活力影响不大。
Q. 全能核酸酶能在尿素环境消化核酸吗？
A：全能核酸酶在尿素浓度为6 M时活性先增加，随着时间延长活性又有降低；在尿素为7 M时，全能核酸酶15分钟后出现变性并失活。但是在酶失活前多数核酸已经降解了。可通过提高全能核酸酶使用浓度补偿7 M尿素的影响。 推荐产品： 科研级
GMP级（无内毒素）
工业级
全能核酸酶检测试剂盒
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