1、目的及适用范围
通过大肠杆菌体外表达重组蛋白，以得到大量目的蛋白来满足实验和工业的需要。
2、主要仪器
超净工作台、恒温摇床、消毒离心管、小型台式离心机
3、试剂及配置方法
3.1 LB液体培养基：10g胰蛋白胨、5g酵母提取物、10gNaCl加水至1L，高压灭菌消毒。
3.2 抗生素（如氨苄青霉素）：用无菌水或生理盐水配制成100mg/mL溶液，置-20℃保存。
4、操作步骤
4.1 将目的基因连接表达载体（pET-30a、pEt22b、pET23a、pGEX-6p-1、pGEX-4T-2），并转化BL21(DE3)或RossetaTM表达菌株。
4.2 挑取阳性单克隆转接至含终浓度A 或K 的液体LB中，37℃，200转/分培养至OD600在0.6-0.8之间。
4.3 取出诱导前全菌对照，在剩余的培养物中加入终浓度为0.5mM的IPTG，37℃，诱导3h。
4.4 取出诱导后全菌。
4.5 SDS-PAGE检测诱导前全菌和诱导后全菌，观察是否有表达。
5、注意事项
IPTG有毒性，在使用过程中浓度不能超过1mM。
6、问题向导
6.1蛋白不表达：可以通过更换载体、酶切为点的选择和密码子的优化来解决。
6.2蛋白表达量较小：可通过更换载体、优化温度、IPTG浓度条件来解决。
6.3蛋白不可溶表达：可从更换载体或优化表达温度（低温如16℃）来进行。
