1、目的及适用范围
有效分离10kd以下的小分子。
2、主要仪器
电泳仪、蛋白电泳槽、脱色摇床
3、试剂及配置方法
3.1 30%丙烯酰胺/0.8%双丙烯酰胺
3.2 3×凝胶缓冲液：2.422gTris 0.02gSDS溶于20mL水，HCL调节pH=8.45
3.3 2×样品缓冲液：12%SDS、6%mercaptoethanol、30%glycerol、0.05%coomassie blue G-250、150mMTrisHCL(pH=7.0)
3.4 10×阴极缓冲液：1.0MTris 1.0MTricine 1%SDS pH约8.25
3.5 5×阳极缓冲液：1.0MTris 、0.225M HCl pH=8.9，HCL调节
3.6 固定液：250mL甲醇、50mL冰醋酸、0.05moL醋酸铵、加水定容500mL ( 0.7mm，30min)
3.7 染色液：0.025%考马斯亮蓝G-250 10%冰醋酸 ( 0.7mm,60min)
3.8 脱色液：10%冰醋酸 ( 0.7mm,2h或者过夜)
4、操作步骤
4.1 胶的配置
储存液分离胶(mL)积层胶(mL)
30%丙烯酰胺/0.8%双丙烯酰胺9.81.62
1×凝胶缓冲液10.03.10
H2O7.037.78
Glycerol3.17
10%过硫酸铵0.050.025
TEMED0.010.005
4.2 其余步骤与普通SDS-PAGE相同，参照普通SDS-PAGE标准操作规程进行。
5、注意事项
5.1 在电泳过程中，电压小于等于60V，电流小于等于40mA为宜。
5.2 本实验适合1-100kD.小蛋白、多肽的分离。
5.3 易降解蛋白电泳需在4℃进行。
6、问题向导
6.1 1-5kd的小分子不能有效显示出；
6.2 可以使用10%的积层胶。
