1、目的及适用范围
该SOP用来规范流式细胞仪标本制备的操作。
2、主要仪器
流式细胞仪BD FacsAria, 冷冻台式离心机
3、试剂及配制方法
3.1 各种特异性单克隆抗体。
3.2 荧光标记的羊抗鼠或兔抗鼠第二抗体，灭活正常兔血清。
3.3 10％ FBS DMEM, PBS、洗涤液（PBS 3S）、固定液（1%多聚甲醛）。
3.4 玻璃管、塑料管、离心机、荧光显微镜等。
3.5 EDTA (5mM) PBS配置。
4、操作步骤
4.1 消化细胞，PBS洗两次，用EDTA消化细胞，重悬在PBS（3% FBS）中，此后都在冰上操作。
4.2 细胞计数后，取相应数量的细胞，按比例加入一抗4℃ 30min。
4.3 用洗涤液洗涤3次，800rpm×5min。
4.4 弃上清，加入工作浓度的羊抗鼠 (或兔抗鼠)荧光标记物，混匀，4℃ 30min。
4.5 用洗涤液洗涤3次，800rpm×5min。
4.6 加适量固定液或直接检测(如为FCM制备标本，一般加入1mL固定液，如制片后在荧光显微镜下观察，视细胞浓度加入100～500μL固定液)。
4.7 FCM检测或制片后荧光显微镜下观察(标本在试管中可保存5～7d)。
5、注意事项
整个操作在4℃下进行，洗涤液中加有比常规防腐剂量高10倍的NaN３，上述实验条件是防止一抗结合细胞膜抗原后发生交联、脱落。洗涤要充分，以避免游离抗体封闭二抗与细胞膜上一抗相结合，出现假阴性。加适量正常兔血清可封闭某些细胞表面免疫球蛋白Fc受体，降低和防止非特异性染色。细胞活性要好，否则易发生非特异性荧光染色。
