蛋白质染色（银染法）标准操作规程（编号：041）
1、目的及适用范围
检测聚丙烯酰胺凝胶中的蛋白质，实验原理是在碱性条件下，用甲醛将蛋白带上的硝酸银（银离子）还原成金属银，以使银颗粒沉积在蛋白带上。染色的程度与蛋白中的一些特殊的基团有关，不含或者很少含半胱氨酸残基的蛋白质有时候呈负染。
2、主要仪器
摇床、避光盒
3、试剂及配制方法
乙醇、冰醋酸、乙酸钠、硫代硫酸钠、硝酸银、碳酸钠、甘氨酸或EDTA.Na2.2H2O、甲醛，去离子水
固定液：100mL乙醇（40%乙醇），25mL冰醋酸（10%冰醋酸）加水到250mL；
致敏液：75mL 乙醇（30%乙醇）17g 乙酸钠，28.2g 三水乙酸钠（34g乙酸钠），0.5g硫代硫酸钠加水到终体积250mL；
银染液：0.625g AgNO3，100 uL37%甲醛（在使用前加入）加水到终体积250mL；
显色液：6.25 g Na2CO3，50 μL 37%甲醛（在使用前加入）加水到终体积250mL；
终止液：3.65g EDTA.Na2.2H2O 或者1g 甘氨酸加水到终体积250mL
保存液：1% 冰醋酸
4、操作步骤
4.1固定：50mL固定液中固定30min或者更长时间
4.2致敏：50mL致敏液中致敏30min
4.3水洗：3 x 10min
4.4银染：50mL银染液中染20min （保持避光）
4.5水洗：2 x 1 min (注意把握时间，水洗时间长显色速度慢，点的颜色偏黄色)
4.6显色：50mL显色液中显色，时间视显色程度而定
4.7终止：50mL终止液中终止10min
4.8保存：1% 冰醋酸，4 ℃
5、注意事项
5.1 固定时间较长，则加一步水洗30min，以免胶太脆而破碎。
5.2 甲醛在使用前加入。
5.3 最好多配制一份显色液，第一次显色到溶液变混浊时换一份显色液，显色到点清晰。
5.4 显色过程很快，要注意把握时间，避免染色过度。
5.5 银染液和显色液需要预冷。
5.6 所用器皿要很洁净，不用手直接接触，以免杂蛋白污染。
5.7 清洗用水尽量用高纯度去离子水，蒸馏水更佳，可以减少背景着色。
5.8 染色过程中，缓慢的振荡是必要的，一般选择40～60 rpm。
5.9 凝胶表面的裂纹多是由于压力、手印及表面干燥所致，所以全程操作中都应带手套。
5.10染色使用的玻璃器皿必须非常干净，用酸浸泡可以满足要求。
5.11银染应尽快照相，随着时间延长，蛋白条带会变浅，而背景会加深。
5.12较深的银染背景多是丙烯酰胺中的杂质所致。
