1、目的及适用范围
该SOP用来规范真核细胞裂解以及细胞中总蛋白提取的操作。
2、主要仪器
细胞刮刀、冰盒、冷冻台式高速离心机、垂直混匀仪、微量移液器
3、试剂及配制方法
3.1 PBS（pH7.4）：NaCl 8g、KCl 0.2g、Na2HPO4·12H2O 3.58g、 KH2PO4 0.24g，定容至1L。
3.2细胞裂解液：1% NP40、150mM NaCl、20mM Hepes pH7.5、10% glycerol、mM EDTA；使用时在每40mL细胞裂解液中加入1片蛋白酶抑制剂cocktail，保存于-20℃。
4、相关器皿的预处理
所有相关容器和器具均需要预冷
5、操作步骤
5.1 吸出要收获的细胞的培养基。
5.2 用PBS洗细胞2次，以完全除去培养基，置于冰上。
5.3 加入合适体积的细胞裂解液（具体加入的量可参照问题向导2），用细胞刮刀将细胞刮下后用移液器将细胞裂解液收集至离心管中。
5.4 将离心管置于冰上10min。
5.5 将离心管放入垂直混匀仪，于4℃中快速垂直混匀30min，以使细胞充分裂解。
5.6 30min后，将离心管拿出，于4℃下12000rpm离心15min。
5.7 吸取上清于新的离心管中，上清即为收获的细胞总蛋白；弃去沉淀，沉淀为细胞核和未破碎的细胞。
6、问题向导
6.1如果要收取的蛋白为核内蛋白，可以在细胞裂解液里加入0.1%-0.5% 的Triton-100，以裂解核膜，释放核蛋白。
6.2加入的细胞裂解液的量根据收获细胞的培养皿规格以及想要获得的目的蛋白的浓度来决定，正常情况下的比例为：
100mm 皿：1.0mL-1.2mL
60mm 皿：400μL
35mm 皿 或6孔板的一个孔：200μL
