实验室常用培养基的配制方法

Ampicillin (100 mg/ml)

■ 配制量      50 ml

■ 配制方法    

1. 称量 5 g Ampicillin 置于 50 ml 离心管中。 

2. 加入 40 ml 灭菌水，充分混合溶解后，定容至 50 ml。 

3. 用 0.22 μm 滤器过滤除菌。 

4. 小份分装（1 ml/份）后，-20℃保存。 

IPTG (24 mg/ml)

■ 配制量      50 ml

■ 配制方法    

1. 称量 1.2 g IPTG 置于 50 ml 离心管中。 

2. 加入 40 ml 灭菌水，充分混合溶解后，定容至 50 ml。 

3. 用 0.22 μm 滤器过滤除菌。 

4. 小份分装（1 ml/份）后，-20℃保存。 

X-Gal (20 mg/ml)

■ 配制量      50 ml

■ 配制方法    

1. 称量 1 g X-Gal 置于 50 ml 离心管中。 

2. 加入 40 ml DMF（二甲基甲酰胺），充分混合溶解后，定容至 50 ml。 

3. 小份分装（1 ml/份）后，-20℃避光保存。 

LB 培养基

■ 组份浓度    1%（W/V）Tryptone，0.5%（W/V）Yeast Extract， 1%（W/V）NaCl 

■ 配制量      1 L 

■ 配制方法    

1. 称量下列试剂，置于 1 L 烧杯中。 

 Tryptone        10 g 

 Yeast Extract  5 g 

 NaCl        10 g

2. 加入约 800 ml 的去离子水，充分搅拌溶解。 

3. 滴加 5 N NaOH（约 0.2 ml），调节 pH 值至 7.0。 

4. 加去离子水将培养基定容至 1 L。 

5. 高温高压灭菌后，4℃保存。 

LB/Amp 培养基

■ 组份浓度

1%（W/V）         Tryptone

0.5%（W/V）        Yeast Extract 

1%（W/V）         NaCl 

0.1 mg/ml           Ampicillin 

■ 配制量      1 L 

■ 配制方法    

1. 称取下列试剂，置于 1 L 烧杯中。 

 Tryptone 10 g

 Yeast Extract   5 g

 NaCl     10 g

2. 加入约 800 ml 的去离子水，充分搅拌溶解。 

3. 滴加 5 N NaOH（约 0.2 ml），调节 pH 值至 7.0。 

4. 加去离子水将培养基定容至 1 L。 

5. 高温高压灭菌后，冷却至室温。 

6. 加入 1 ml Ampicillin（100 mg/ml）后均匀混合。 

7. 4℃保存。 

TB 培养基

■ 组份浓度

1.2%（W/V）       Tryptone

2.4%（W/V）       Yeast Extract 

0.4%（V/V）        Glycerol 

17 mM                 KH₂PO₄ 

72 mM                 K₂HPO₄ 

■ 配制量      1 L 

■ 配制方法    

1. 配制磷酸盐缓冲液（0.17 M KH2PO₄，0.72 M K2HPO₄）100 ml。 

   溶解 2.31 g KH₂PO₄ 和 12.54 g K₂HPO₄ 于 90 ml 的去离子水中，搅拌溶解后，加去离子水定容至 100 ml，高温高压灭菌。 

2. 称取下列试剂，置于 1 L 烧杯中。 

 Tryptone 12 g 

 Yeast Extract   24 g 

Glycerol     4 ml

3. 加入约 800 ml 的去离子水，充分搅拌溶解。 

4. 加去离子水将培养基定容至 1 L，高温高压灭菌。 

5. 待溶液冷却至 60℃以下时，加入 100 ml 的上述灭菌磷酸盐缓冲液。 

6. 4℃保存。 

TB/Amp 培养基

■ 组份浓度

1.2%（W/V）       Tryptone

2.4%（W/V）       Yeast Extract 

0.4%（V/V）        Glycerol 

17 mM                 KH₂PO₄ 

72 mM                 K₂HPO₄ 

0.1 mg/ml          Ampicillin 

■ 配制量      1 L 

■ 配制方法    

1. 配制磷酸盐缓冲液（0.17 M KH₂PO₄，0.72 M K₂HPO₄）100 ml。 

   溶解 2.31 g KH₂PO4 和 12.54 g K₂HPO4 于 90 ml 的去离子水中，搅拌溶解后，加去离子水定容至 100 ml，高温高压灭菌。 

2. 称取下列试剂，置于 1 L 烧杯中。 

 Tryptone  12 g

 Yeast Extract   24 g

 Glycerol        4 ml

2. 加入约 800 ml 的去离子水，充分搅拌溶解。 

3. 加去离子水将培养基定容至 1 L 后，高温高压灭菌。 

4. 待溶液冷却至 60℃以下时，加入 100 ml 的上述灭菌磷酸盐缓冲液和 1 ml 的 Ampicillin（100 mg/ml）。 

5. 均匀混合后 4℃保存。 

SOB 培养基

■ 组份浓度

2%（W/V）           Tryptone

0.5%（W/V）         Yeast Extract 

0.05%（W/V）       NaCl 

2.5 mM                  KCl 

10 mM                   MgCl₂ 

■ 配制量      1 L 

■ 配制方法    

1. 配制 250 mM KCl 溶液。 

在 90 ml 的去离子水中溶解 1.86 g KCl 后，定容至 100 ml。 

2. 配制 2 M MgCl2 溶液。 

在 90 ml 去离子水中溶解 19 g MgCl2后，定容至 100 ml，高温高压灭菌。 

3. 称取下列试剂，置于 1 L 烧杯中。 

 Tryptone 20 g 

Yeast Extract   5 g 

NaCl        0.5 g

4. 加入约 800 ml 的去离子水，充分搅拌溶解。 

5. 量取 10 ml 250 mM KCl 溶液，加入到烧杯中。 

6. 滴加 5 N NaOH 溶液（约 0.2 ml），调节 pH 值至 7.0。 

7. 加入去离子水将培养基定容至 1 L。 

8. 高温高压灭菌后，4℃保存。 

9. 使用前加入 5 ml 灭菌的 2 M MgCl2 溶液。 

SOC 培养基

■ 组份浓度

2%（W/V）          Tryptone

0.5%（W/V）        Yeast Extract 

0.05%（W/V）      NaCl 

2.5 mM                  KCl 

10 mM                   MgCl₂ 

20 mM                  葡萄糖 

■ 配制量      100 ml 

■ 配制方法    

1. 配制 1 M 葡萄糖溶液。 

将 18 g 葡萄糖溶于 90 ml 去离子水中，充分溶解后定容至 100 ml，用 0.22 μm 滤器过滤除菌。 

2. 向 100 ml SOB 培养基中加入除菌的 1 M 葡萄糖溶液 2 ml，均匀混合。 

3. 4℃保存。 

2×YT 培养基

■ 组份浓度    1.6%（W/V）Tryptone，1%（W/V）Yeast Extract，0.5%（W/V）NaCl 

■ 配制量      1 L 

■ 配制方法    

1. 称取下列试剂，置于 1 L 烧杯中。 

 Tryptone  16 g

 Yeast Extract   10 g

 NaCl        5 g

2. 加入约 800 ml 的去离子水，充分搅拌溶解。 

3. 滴加 5 N NaOH，调节 pH 值至 7.0。 

4. 加去离子水将培养基定容至 1 L。 

5. 高温高压灭菌后，4℃保存。 

Φb×broth

■ 组份浓度    2%（W/V）Tryptone，0.5%（W/V）Yeast Extract，0.5%（W/V）MgSO₄·7H₂O 

■ 配制量      1 L 

■ 配制方法    

1. 称取下列试剂，置于 1 L 烧杯中。 

 Tryptone    20 g 

Yeast Extract      5 g

MgSO₄·7H₂O     5 g

2. 加入约 800 ml 的去离子水，充分搅拌溶解。 

3. 滴加 1 N KOH，调节 pH 值至 7.5。 

4. 加去离子水将培养基定容至 1 L。 

5. 高温高压灭菌后，4℃保存。 

NZCYM 培养基

■ 组份浓度

0.5%（W/V）       Yeast Extract

0.1%（W/V）       Casamino Acid 

1%（W/V）          NZ 胺 

0.5%（W/V）       NaCl 

0.2%（W/V）        MgSO₄·7H₂O 

■ 配制量      1 L 

■ 配制方法    

1. 称取下列试剂，置于 1 L 烧杯中。 

 Yeast Extract           5 g 

Casamino Acid        1 g

NZ 胺        10 g

NaCl             5 g

MgSO₄·7H₂O          2 g

2. 加入约 800 ml 的去离子水，充分搅拌溶解。 

3. 滴加 5 N NaOH（约 0.2 ml），调节 pH 值至 7.0。 

4. 加去离子水将培养基定容至 1 L。 

5. 高温高压灭菌后，4℃保存。 

NZYM 培养基

■ 组份浓度

0.5%（W/V）       Yeast Extract

1%（W/V）         NZ 胺 

0.5%（W/V）      NaCl 

0.2%（W/V）      MgSO₄·7H₂O 

■ 配制方法    

NZYM 培养基除不含 Casamino Acid（酪蛋白氨基酸）外，其他成份与 NZCYM 培养基相同。 

NZM 培养基

■ 组份浓度

1%（W/V）       NZ 胺

0.5%（W/V）      NaCl 

0.2%（W/V）        MgSO₄·7H₂O 

■ 配制方法    

NZM 培养基除不含 Yeast Extract（酵母提取物）外，其他成份与 NZYM 培养基相同。 

一般固体培养基的配制

■ 配制方法    

1. 按照液体培养基配方准备好液体培养基，在高温高压灭菌前，加入下列试剂中的一种。 

 Agar（琼脂：铺制平板用）              15 g/L 

Agar（琼脂：配制顶层琼脂用）          7 g/L 

Agarose（琼脂糖：铺制平板用）      15 g/L 

Agarose（琼脂糖：配制顶层琼脂用） 7 g/L 

2. 高温高压灭菌后，戴上手套取出培养基，摇动容器使琼脂或琼脂糖充分混匀（此时培养基温度很高，小心烫伤）。 

3. 待培养基冷却至 50～60℃时，加入热不稳定物质（如抗生素等），摇动容器充分混匀。 

4. 铺制平板（30～35 ml 培养基/90 mm 培养皿）。 

LB/Amp/X-Gal/IPTG 平板培养基 

■ 组份浓度

1%（W/V）           Tryptone

0.5%（W/V）        Yeast Extract 

1%（W/V）           NaCl 

0.1 mg/ml             Ampicillin 

0.024 mg/ml         IPTG 

0.04 mg/ml           X-Gal 

1.5%（W/V）       Agar 

■ 配制量      1 L 

■ 配制方法    

1. 称取下列试剂，置于 1 L 烧杯中。 

 Tryptone 10 g 

Yeast Extract     5 g

NaCl         10 g

2. 加入约 800 ml 的去离子水，充分搅拌溶解。 

3. 滴加 5 N NaOH（约 0.2 ml），调节 pH 值至 7.0。 

4. 加去离子水将培养基定容至 1 L 后，加入 15 g Agar。 

5. 高温高压灭菌后，冷却至 60℃保存。 

6. 加入 1 ml Ampicillin（100 mg/ml）、1 ml IPTG（24 mg/ml）、2 ml X-Gal（20 mg/ml）后均匀混合。 

7. 铺制平板（30～35 ml 培养基/90 mm 培养皿）。 

8. 4℃避光保存。 

TB/Amp/X-Gal/IPTG 平板培养基

■ 组份浓度

1.2%（W/V）     Tryptone

 2.4%（W/V）      Yeast Extract 

0.4%（W/V）      Glycerol 

17 mM                KH₂PO₄ 

72 mM                K₂HPO₄ 

0.1 mg/ml           Ampicillin 

0.024 mg/ml       IPTG 

0.04 mg/ml         X-Gal 

1.5%（W/V）      Agar 

■ 配制量      1 L 

■ 配制方法    

1. 配制磷酸盐缓冲液（0.17 M KH₂PO4，0.72 M K₂HPO4）100 ml。 

溶解 2.31 g KH2PO4 和 12.54 g K2HPO4 于 90 ml 的去离子水中，搅拌溶解后，加去离子水定容至 100 ml，高温高压灭菌。 

2. 称取下列试剂，置于 1 L 烧杯中。 

 Tryptone   12 g

 Yeast Extract     24 g

 Glycerol        4 ml

3. 加入约 800 ml 的去离子水，充分搅拌溶解。 

4. 加去离子水将培养基定容至 1 L 后，加入 15 g Agar。 

5. 高温高压灭菌后，冷却至 60℃保存。 

6. 加入 100 ml 的上述灭菌磷酸盐缓冲液、1 ml Ampicillin（100 mg/ml）、1 ml IPTG（24 mg/ml）、2 ml X-Gal（20 mg/ml）后均匀混合。 

7. 铺制平板（30～35 ml 培养基/90 mm 培养皿）。 

8. 4℃避光保存。