核酸电泳相关试剂、缓冲液的配制方法

50×TAE Buffer (pH8.5)

■ 组份浓度    2 M Tirs-醋酸，100 mM EDTA

■ 配制量      1 L

■ 配制方法    

1. 称量下列试剂，置于 1 L 烧杯中。 

 Tris                                   242 g  

Na2EDTA·2H2O   37.2 g

2. 向烧杯中加入约 800 ml 的去离子水，充分搅拌溶解。 

3. 加入 57.1 ml 的醋酸，充分搅拌。 

4. 加去离子水将溶液定容至 1 L 后，室温保存。 

10×TBE Buffer  (pH8.3)

■ 组份浓度    890 mM Tirs-硼酸，20 mM EDTA

■ 配制量      1 L

■ 配制方法    

1. 称量下列试剂，置于 1 L 烧杯中。 

 Tris                     108 g  

Na2EDTA·2H2O  7.44 g

硼酸                55 g 

2. 向烧杯中加入约 800 ml 的去离子水，充分搅拌溶解。 

3. 加去离子水将溶液定容至 1 L 后，室温保存。 

10×MOPS Buffer

■ 组份浓度    200 mM MOPS，20 mM NaOAc，10 mM EDTA

■ 配制量      1 L 

■ 配制方法    

1. 称量 41.8 g MOPS，置于 1 L 烧杯中。 

2. 加约 700 ml DEPC 处理水，搅拌溶解。 

3. 使用 2 N NaOH 调节 pH 值至 7.0。 

4. 再向溶液中加入下列试剂。 

 1 M NaOAc（DEPC 处理）              20 ml

0.5 M EDTA（pH8.0）（DEPC 处理）   20 ml 

5. 用 DEPC 处理水将溶液定容至 1 L。 

6. 用 0.45 μm 滤膜过滤除去杂质。 

7. 室温避光保存。 

注：溶液见光或高温灭菌后会变黄。变黄时也可使用，但变黑时不要使用。 

溴乙锭  (10 mg/ml)

■ 组份浓度    10 mg/ml 溴乙锭

■ 配制量      100 ml

■ 配制方法    

1. 称量 1 g 溴乙锭，加入到 100 ml 容器中。 

2. 加入去离子水 100 ml，充分搅拌数小时完全溶解溴乙锭。 

3. 将溶液转移至棕色瓶中，室温避光保存。 

4. 溴乙锭的工作浓度为 0.5 μg/ml。 

注意：溴乙锭是一种致癌物质，必须小心操作。 

琼脂糖凝胶

■ 配制方法    

1. 配制适量的电泳及制胶用的缓冲液（通常是 0.5×TBE 或1×TAE）。 

2. 根据制胶量及凝胶浓度，准确称量琼脂糖粉，加入适当的锥形瓶中。 

3. 加入一定量的电泳缓冲液（总液体量不宜超过锥形瓶的50%容量）。 

注：用于电泳的缓冲液和用于制胶的缓冲液必须统一。 

4. 在锥形瓶的瓶口封上保鲜膜，并在膜上扎些小孔，然后在微波炉中加热熔化琼脂糖。加热过程中，当溶液沸腾后，请戴上防热手套，小心摇动锥形瓶，使琼脂糖充分熔化。此操作重复数次，直至琼脂糖完全熔化。必须注意，在微波炉中加热时间不宜过长，每次当溶液起泡沸腾时停止加热，否则会引起溶液过热暴沸，造成琼脂糖凝胶浓度不准，也会损坏微波炉。熔化琼脂糖时，必须保证琼脂糖充分完全熔化，否则，会造成电泳图像模糊不清。 

5. 使溶液冷却至60℃左右，如需要可在此时溴乙锭溶液（终浓度 0.5 μg/ml），并充分混匀。 

注：溴乙锭是一种致癌物质。使用含有溴乙锭的溶液时，请戴好手套。 

6. 将琼脂糖溶液倒入制胶模中，然后在适当位置处插上梳子。凝胶厚度一般在 3～5 mm 之间。 

7. 在室温下使胶凝固（大约 30 分钟～1 小时），然后放置于电泳槽中进行电泳。 

注：凝胶不立即使用时，请用保鲜膜将凝胶包好后在 4℃下保存，一般可保存 2～5 天。 

■ 琼脂糖凝胶浓度与线形 DNA 的最佳分辨范围 

琼脂糖浓度 最佳线形 DNA 分辨范围（bp）

0.5% 1,000～30,000

0.7% 800～12,000

1.0% 500～10,000

1.2% 400～7,000

1.5% 200～3,000

2.0% 50～2,000

6×Loading Buffer (DNA 电泳用) 

■ 组份浓度

30 mM                EDTA

36%（V/V）        Glycerol 

0.05%（W/V）     Xylene Cyanol FF

0.05%（W/V）     Bromophenol Blue 

■ 配制量      500 ml 

■ 配制方法    

1. 称量下列试剂，置于 500 ml 烧杯中。 

 EDTA                             4.4 g 

Bromophenol Blue   250 mg 

 Xylene Cyanol FF      250 mg  

2. 向烧杯中加入约 200 ml 的去离子水后，加热搅拌充分溶解。 

3. 加入 180 ml 的甘油（Glycerol）后，使用 2 N NaOH调节 pH 值至 7.0。 

4. 用去离子水定容至 500 ml 后，室温保存。 

10×Loading Buffer (RNA 电泳用) 

■ 组份浓度

10 mM                EDTA

50%（V/V）        Glycerol 

0.25%（W/V）     Xylene Cyanol FF

0.25%（W/V）     Bromophenol Blue 

■ 配制量      10 ml 

■ 配制方法    

1. 称量下列试剂，置于 10 ml 离心管中。 

 0.5 M EDTA（pH8.0） 200 μl 

 Bromophenol Blue         25 mg 

Xylene Cyanol FF          25 mg 

2. 向离心管中加入约 4 ml 的 DEPC 处理水后，充分搅拌溶解。 

3. 加入 5 ml 的甘油（Glycerol）后，充分混匀。 

4. 用 DEPC 处理水定容至 10 ml 后，室温保存。