蛋白质电泳相关试剂、缓冲液的配制方法

30%（W/V）丙烯酰胺

■ 配制量      1 L 

■ 配制方法    

1. 称量下列试剂，置于 1 L 烧杯中。 

 Acrylamide 290 g 

 BIS              10 g

2. 向烧杯中加入约 600 ml 的去离子水，充分搅拌溶解。 

3. 加去离子水将溶液定容至 1 L，用 0.45 μm 滤器滤去杂质。 

4. 于棕色瓶中 4℃保存。 

注意：丙烯酰胺具有神经毒性，可通过皮肤吸收，其作用具有积累性，配制时应戴手套。聚丙烯酰胺无毒，但也应谨慎操作，因为有可能含有少量的未聚合成份。

40%（W/V）丙烯酰胺  

■ 配制量      1 L 

■ 配制方法    

1. 称量下列试剂，置于 1 L 烧杯中。 

 Acrylamide   380 g

 BIS                    20 g

2. 向烧杯中加入约 600 ml 的去离子水，充分搅拌溶解。 

3. 加去离子水将溶液定容至 1 L，用 0.45 μm 滤器滤去杂质。 

4. 于棕色瓶中 4℃保存。 

注意：丙烯酰胺具有神经毒性，可通过皮肤吸收，其作用具有积累性，配制时应戴手套。聚丙烯酰胺无毒，但也应谨慎操作，因为有可能含有少量的未聚合成份。 

10%（W/V）过硫酸铵  

■ 配制量      10 ml 

■ 配制方法    

1. 称取 1 g 过硫酸铵。 

2. 加入 10 ml 的去离子水后搅拌溶解。 

3. 贮存于 4℃。 

注意：10%过硫酸铵溶液在 4℃保存时可使用 2 周左右，超过期限会失去催化作用。 

5×Tris-Glycine Buffer (SDS-PAGE 电泳缓冲液)

■ 组份浓度    0.125 M Tris，1.25 M Glycine，0.5%（W/V）SDS

■ 配制量      1 L

■ 配制方法    

1. 称量下列试剂，置于 1 L 烧杯中。 

 Tris              15.1 g 

Glycine         94 g

 SDS          5.0 g 

2. 向烧杯中加入约 800 ml 的去离子水，搅拌溶解。 

3. 加去离子水将溶液定容至 1 L 后，室温保存。 

5×SDS-PAGE Loading Buffer 

■ 组份浓度

250 mM               Tris-HCl（pH6.8）

10%（W/V）           SDS

0.5%（W/V）          BPB 

50%（V/V）           甘油 

5%（V/V）            β-巯基乙醇（2-ME） 

■ 配制量      5 ml 

■ 配制方法    

1. 量取下列试剂，置于 10 ml 塑料离心管中。 

 1 M Tris-HCl（pH6.8）  1.25 ml  

SDS                                     0.5 g

BPB                              25 mg

甘油                            2.5 ml

2. 加去离子水溶解后定容至 5 ml。 

3. 小份（500 μl/份）分装后，于室温保存。 

4. 使用前将 25 μl 的 2-ME 加到每小份中。 

5. 加入 2-ME 的 Loading Buffer 可在室温下保存一个月左右。 

考马斯亮蓝 R-250 染色液

■ 组份浓度    0.1%（W/V）考马斯亮蓝 R-250，25%（V/V）异丙醇，10%（V/V）冰醋酸 

■ 配制量      1 L 

■ 配制方法    

1. 称取 1 g 考马斯亮蓝 R-250，置于 1 L 烧杯中。 

2. 量取 250 ml 的异丙醇加入上述烧杯中，搅拌溶解。 

3. 加入 100 ml 的冰醋酸，搅拌均匀。 

4. 加入 650 ml 的去离子水，搅拌均匀。 

5. 用滤纸除去颗粒物质后，室温保存。 

考马斯亮蓝染色脱色液

■ 组份浓度    10%（V/V）醋酸，5%（V/V）乙醇

■ 配制量      1 L 

■ 配制方法    

1. 量取下列溶液，置于 1 L 烧杯中。 

 醋酸 100 ml

 乙醇      50 ml

dH2O    850 ml 

2. 充分混合后使用。 

凝胶固定液 (SDS-PAGE 银氨染色用)

■ 组份浓度    50%（V/V）甲醇，10%（V/V）醋酸

■ 配制量      1 L

■ 配制方法    

1. 量取下列试剂，置于 1 L 试剂瓶中。 

 甲醇 醋酸 dH2O 500 ml 100 ml 400 ml

2. 均匀混合后室温保存。 

凝胶处理液 (SDS-PAGE 银氨染色用) 

■ 组份浓度    50%（V/V）甲醇，10%（V/V）戊二醛

■ 配制量      100 ml

■ 配制方法    

1. 量取下列试剂，加入 100～200 ml 的试剂瓶中。 

 甲醇   50 ml  

戊二醛    10 ml

dH2O   40 ml 

2. 均匀混合后室温保存。 

凝胶染色液 (SDS-PAGE 银氨染色用)

■ 组份浓度    0. 4%（W/V）AgNO3，1%（V/V）浓 NH3·H2O，0.04%（W/V）NaOH

■ 配制量      100 ml 

■ 配制方法    

1. 量取下列试剂，加入 100～200 ml 的试剂瓶中。 

 20% AgNO₃    2 ml  

 浓 NH₃·H₂O   1 ml 

4% NaOH  1 ml  

dH₂O       96 ml

2. 均匀混合。该溶液应为无色透明状。如氨水浓度过低时溶液会呈混浊状，此时应补加浓氨水，直至透明。 

3. 本染色液应现用现配，不宜保存。 

显影液 (SDS-PAGE 银氨染色用)

■ 组份浓度    0.005%（W/V）柠檬酸，0.02%（V/V）甲醛

■ 配制量      1 L

■ 配制方法    

1. 称量下列试剂，置于 1 L 试剂瓶中。 

 柠檬酸  50 mg 

 甲醛   0.2 ml

2. 加入 1 L 去离子水后，摇动混合溶解。 

3. 室温保存。