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实验室常用试剂、缓冲液的配制方法1 M Tris-HCl 1. 称量 121.1 g Tris 置 于 1 L 烧杯中。 2. 加入约 800 ml 的去离子水，充分搅拌溶解。 3. 按下表量加入浓盐酸调节所需要的 pH 值。 pH 值 7.4 7.6 8.0 浓 HCl 约 70 ml 约 60 ml 约 42 ml 4. 将溶液定容至 1 L。 5. 高温高压灭菌后，室温保存。 注意：应使溶液冷至室温后再调定 pH 值，因为 Tris 溶液的pH 值随温度的变化差异很大，温度每升高 1℃，溶液的 pH 值大约降低 0.03 个单位。 10×TE Buffer 1. 量取下列溶液，置于 1 L 烧杯中。 1 M Tris-HCl Buffer（pH 7.4,7.6,8.0） 100 ml 500 mM EDTA (pH 8.0) 20 ml 2. 向烧杯中加入约 800 ml 的去离子水，均匀混合。 3. 将溶液定容至 1 L 后，高温高压灭菌。 4. 室温保存。 3 M 醋酸钠 (pH5.2) 1. 称量 40.8 g NaOAc·3H2O 置于 100～200 ml 烧杯中， 加入约 40 ml 的去离子水搅拌溶解。 2. 加入冰醋酸调节 pH 值至 5.2。 3. 加去离子水将溶液定容至 100 ml。 4. 高温高压灭菌后，室温保存。 PBS Buffer ■ 组份浓度 137 mM NaCl，2.7 mM KCl，10 mM Na2HPO4，2 mM KH2PO4 ■ 配制量 1 L ■ 配制方法 1. 称量下列试剂，置于 1 L 烧杯中。 NaCl 8 g KCl 0.2 g Na2HPO4 1.42 g KH2PO4 0.27 g 2. 向烧杯中加入约 800 ml 的去离子水，充分搅拌溶解。 3. 滴加浓盐酸将 pH 值调节至 7.4，然后加入去离子水将溶液定容至 1 L。 4. 高温高压灭菌后，室温保存。 注意：上述 PBS Buffer 中无二价阳离子，如需要，可在配方中补充 1 mM CaCl2 和 0.5 mM MgCl2。 10 M 醋酸铵 ■ 配制量 100 ml ■ 配制方法 1. 称量 77.1 醋酸铵置于 100～200 ml 烧杯中， 加入约 30 ml的去离子水搅拌溶解。 2. 加去离子水将溶液定容至 100 ml。 3. 使用 0.22 μm 滤器过滤除菌。 4. 密封瓶口于室温保存。 注意：醋酸铵受热易分解，所以不能高温高压灭菌。 10%（W/V）SDS ■ 配制量 100 ml ■ 配制方法 1. 称量 10 g 高纯度的 SDS 置于 100～200 ml 烧杯中， 加入约 80 ml 的去离子水，68℃加热溶解。 2. 滴加浓盐酸调节 pH 值至 7.2。 3. 将溶液定容至 100 ml 后，室温保存。 2 N NaOH ■ 配制量 100 ml ■ 配制方法 1. 量取 80 ml 去离子水置于 100～200 ml 塑料烧杯中（NaOH 溶解过程中大量放热，有可能使玻璃烧杯炸裂）。 2. 称取 8 g NaOH 小心地逐渐加入到烧杯中，边加边搅拌。 3. 待 NaOH 完全溶解后，用去离子水将溶液定容至 100ml。 4. 将溶液转移至塑料容器中后，室温保存。 2.5 N HCl ■ 配制量 100 ml ■ 配制方法 1. 在78.4 ml的去离子水中加入21.6 ml的浓盐酸（11.6 N），均匀混合。 2. 室温保存。 5 M NaCl ■ 配制量 1 L ■ 配制方法 1. 称取 292.2 g NaCl 置于 1 L 烧杯中，加入约 800 ml 的去离子水后搅拌溶解。 2. 加去离子水将溶液定容至 1 L 后，适量分成小份。 3. 高温高压灭菌后，4℃保存。 20%（W/V）Glucose ■ 配制量 100 ml ■ 配制方法 1. 称取 20 g Glucose 置于 100～200 ml 烧杯中，加入约80 ml 的去离子水后，搅拌溶解。 2. 加去离子水将溶液定容至 100 ml。 3. 高温高压灭菌后，4℃保存。 Solution I (质粒提取用) ■ 组份浓度 25 mM Tris-HCl（pH8.0），10 mM EDTA，50 mM Glucose ■ 配制量 1 L ■ 配制方法 1. 量取下列溶液，置于 1 L 烧杯中。 1 M Tris-HCl（pH8.0） 25 ml 0.5 M EDTA（pH8.0） 20 ml 20% Glucose（1.11 M） 45 ml dH2O 910 ml 2. 高温高压灭菌后，4℃保存。 3. 使用前每 50 ml 的 Solution I 中加入 2 ml 的 RNase A（20 mg/ml）。 Solution II (质粒提取用) ■ 组份浓度 200 mM NaOH，1%（W/V）SDS ■ 配制量 500 ml ■ 配制方法 1. 量取下列溶液，置于 500 ml 烧杯中。 10% SDS 50 ml 2 N NaOH 50 ml 2. 加灭菌水定容至 500 ml，充分混匀。 3. 室温保存。此溶液保存时间最好不要超过一个月。 注意：SDS 易产生气泡，不要剧烈搅拌。 Solution III (质粒提取用) ■ 组份浓度 3 M KOAc，5 M CH3COOH ■ 配制量 500 ml ■ 配制方法 1. 称量下列试剂，置于 500 ml 烧杯中。 KOAc 147 g CH3COOH 57.5 ml 2. 加入 300 ml 去离子水后搅拌溶解。 3. 加入去离子水将溶液定容至 500 ml。 4. 高温高压灭菌后，4℃保存。 0.5 M EDTA (pH8.0) ■ 配制量 1 L ■ 配制方法 1. 称取 186.1 g Na2EDTA·2H2O，置于 1 L 烧杯中。 2. 加入约 800 ml 的去离子水，充分搅拌。 3. 用 NaOH 调节 pH 值至 8.0（约 20 g NaOH）。 注意：pH 至 8.0 时，EDTA 才能完成溶解。 4. 加去离子水将溶液定容至 1 L。 5. 适量分成小份后，高温高压灭菌。 6. 室温保存。 1 M DTT ■ 配制量 20 ml ■ 配制方法 1. 称取 3.09 g DTT，加入到 50 ml 塑料离心管内。 2. 加入 20 ml 的 0.01 M NaOAc（pH5.2），溶解后使用 0.22μm 滤器过滤除菌。 3. 适量分成小份后，-20℃保存。 10 mM ATP ■ 配制量 20 ml ■ 配制方法 1. 称取 121 mg Na2ATP·3H2O，加入到 50 ml 塑料离心管内。 2. 加 20 ml 的 25 mM Tris-HCl（pH8.0），搅拌溶解。 3. 适量分成小份后，-20℃保存。 |
