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全能核酸酶-纯化细胞治疗产品、抗体及疫苗的利器核酸酶是在核酸分解过程中水解核苷酸之间磷酸二酯键的一种蛋白酶。在高等动植物中都有作用于磷酸二酯键的不同来源的核酸酶，其专一性、作用方式都有所不同。有些核酸酶只能作用于RNA，称为核糖核酸酶（RNase），有些核酸酶只能作用于DNA，称为脱氧核糖核酸酶（DNase），有些核酸酶专一性较低，既能作用于RNA也能作用于DNA，因此统称为核酸酶（nuclease）。根据核酸酶作用位置不同，又可将核酸酶分为核酸外切酶（exonuclease）和核酸内切酶（endonuclease）。 核酸酶历史 20世纪70年代，在细菌中陆续发现了一类核酸内切酶，能专一性地识别并水解双链DNA上的特异核苷酸顺序，称为限制性核酸内切酶（restriction endonuclease，简称限制酶）。当外源DNA侵入细菌后，限制性内切酶可将其水解切成片段，从而限制了外源DNA在细菌细胞内的表达，而细菌本身的DNA由于在该特异核苷酸顺序处被甲基化酶修饰，不被水解，从而得到保护。 核酸酶分类介绍 (1) 核酸外切酶 有些核酸酶能从DNA或RNA链的一端逐个水解下单核苷酸，所以称为核酸外切酶。只作用于DNA的核酸外切酶称为脱氧核糖核酸外切酶，只作用于RNA的核酸外切酶称为核糖核酸外切酶；也有一些核酸外切酶可以作用于DNA或RNA，被称为全能核酸酶。核酸外切酶从3′端开始逐个水解核苷酸，称为3′→5′外切酶，例如蛇毒磷酸二酯酶即是一种3′→5′外切酶，水解产物为5′核苷酸；核酸外切酶从5′端开始逐个水解核苷酸，称为5′→3′外切酶，例如：牛脾磷酸二酯酶即是一种5′→3′外切酶，水解产物为3′核苷酸。 (2) 核酸内切酶 核酸内切酶催化水解多核苷酸内部的磷酸二酯键。有些核酸内切酶仅水解5′磷酸二酯键，把磷酸基团留在3′位置上，称为5′-内切酶；而有些仅水解3′-磷酸二酯键，把磷酸基团留在5′位置上，称为3′-内切酶。还有一些核酸内切酶对磷酸酯键一侧的碱基有专一要求，例如胰脏核糖核酸酶（RNaseA）即是一种高度专一性核酸内切酶，它作用于由嘧啶核苷酸C‘3处的羟基与下一个核苷酸C5’处的磷酸形成的3‘，5’-磷酸二脂键，产物为以3′嘧啶核苷酸结尾的低聚核苷酸和以5’核苷酸开头的低聚核苷酸。 (3) 非特异性核酸酶 全能核酸酶是一种来源于粘质沙雷氏菌（Serratia marcescens）的非特异性核酸内切酶，可在非常广泛的条件下（6 M Urea，0.1 M Guanidine HCl，0.4% Triton X-100，0.1% SDS，1 mM EDTA，1 mM PMSF）将双链、单链、线状、环状的 DNA 和 RNA完全酶解成2-5个碱基长度的5'-单磷酸寡核苷酸，广泛用于去除生物制品中的核酸。本品经基因工程改造在大肠杆菌（Escherichia coli）中表达纯化并在GMP环境下制备，不仅可在科学研究中降低细胞上清和细胞裂解液的粘度，提高蛋白纯化效率及功能研究；还可以应用在病毒纯化、疫苗生产、蛋白和多糖类制药工业用作去除宿主核酸，快速将宿主残留核酸降至皮克（pg）级别从而提高生物制品产量和安全性；并且可以有效防止细胞治疗和疫苗研究中人外周血单核细胞（PBMC）的结团。含有标签的核酸酶便于酶解后通过对应的亲和resin去除。 随着越来越多的生物制品（重组蛋白、Vero细胞疫苗、细胞治疗/基因治疗药物等）进入治疗领域，生物制品的质量控制也日趋严格，其中核酸残留是各类质控标准的重中之重，因为DNA较好的稳定性，容易在生产过程中形成残留，而这些生物制品应用到人类疾病预防和治疗时，会带来不可控危险因素。终产品的宿主核酸残留量必须遵循WHO、FDA和EMEA以及我国NMPA监管条例。尤其近年来包括大牌进口产品在内的狂犬疫苗DNA残留超标问题，引起了社会和业界的广泛关注。WHO和各国药物监管机构一般将疫苗等生物制品的残留DNA控制在100pg/剂量，特殊情况下最高允许10ng/剂量。我国参照WHO、FDA和欧盟标准，在药典中对生物制品的核酸残留量有明确规定。药典中明确规定酵母、大肠杆菌表达的生物制品中DNA残留量不超过10ng/剂量。我国2020年药典将人用狂犬病疫苗（Vero细胞）DNA残留标准更新为≤3ng/剂量。本产品无动物源性, 无氨苄青霉素，可高效降解单链、双链、线性、环状、超螺旋等任何形式的DNA及RNA。 全能核酸酶优势： 1. 无动物源性、无氨苄青霉素。 2. 杰出单位比酶活、更高效的核酸降解能力。 3. 严格的质控标准，内毒水平低，确保单位酶活的准确性以及批次间稳定性。 全能核酸酶应用条件： 全能核酸酶的酶活会受到多种因素的影响（例如温度、pH、离子强度等），故用量范围也会从0.1 U/mL-250 U/mL不等。因此，不同的操作环境下酶的最佳浓度不同，需要通过实验设置梯度进行最佳条件的摸索。 质量控制 1. 宿主蛋白残留：酶联免疫检测试剂盒未检测到宿主蛋白。 2. 蛋白酶残留：250KU/mL 的全能核酸酶与底物反应 60min，未检测到活力。 3. 细菌内毒素（Endotoxin）：LAL-Test，中国药典 2020 版第四部凝胶限度试验法通则（1143）。 4. 微生物负载：中国药典2020版第四部无菌检查法通则（1101），中华人民共和国国家标准，GB 4789.2-2016。 5. 重金属残留：电感耦合等离子体发射光谱法，HJ776-2015。 用途及建议用量 1. 用于去除疫苗类产品外源性核酸，降低核酸残留毒性风险，提高产品安全性。 2. 用于降低核酸引起的料液粘度，缩短处理时间，提高蛋白产量。 3. 用于去除缠绕在颗粒（病毒、包涵体等）表面的核酸，利于颗粒的释放和纯化。 4. 用于柱层析、电泳和印迹分析的样品制备，核酸酶处理后可提高分辨率和回收率。 5. 在基因治疗中除去核酸，得到纯化的腺相关病毒。 推荐产品： 科研级
GMP级（无内毒素）
工业级
全能核酸酶检测试剂盒
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